四、組織器官體外模型的建立及生命再生物質(zhì)的組成
組織器官體外模型的建立是從獲取原位組織細胞開始,用美寶生命再生物質(zhì)與MEM培養(yǎng)液培養(yǎng)組織細胞,使其增殖分化,形成原位組織或組織器官,從而建立了體外的組織器官模型。而后再以此模型,精確尋找各組織器官的專項生命物質(zhì),最后將所找到的生命物質(zhì)與美寶生命物質(zhì)一起組成組織器官的生命再生物質(zhì),以各種適當(dāng)?shù)膭┬陀糜谠坏慕M織器官,使其原位再生復(fù)制。
1、組織潛能再生細胞的激活和增殖分化
原位復(fù)制組織器官的生命基礎(chǔ)是原位器官組織中的潛能再生細胞,而潛能再生細胞的來源是原位的組織細胞,所以首先必須認識組織再生潛能細胞的特性和變化規(guī)律,才能理解組織器官再生復(fù)制的機理和程序。經(jīng)過研究,我們已經(jīng)掌握了這一細胞的增殖再生特性,即,原位的組織細胞在被激活后,由靜止狀態(tài)變?yōu)榉至褷顟B(tài),而后在生命再生物質(zhì)的作用下,轉(zhuǎn)為增殖和分化,在大量的增殖和分化后,這些細胞則根據(jù)自身的遺傳特性,自動連接形成新組織,并向成熟的組織器官形態(tài)發(fā)展,最終形成原位新的組織器官。詳看細胞變化的圖片介紹(圖4.1-4.5)。(關(guān)于潛能再生細胞的研究,將在另一文章中介紹)。
第一步:從體外培養(yǎng)的組織塊中分離組織細胞
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第二步:培養(yǎng)由組織中分離的組織細胞
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第三步:潛能再生細胞(PRCs)開始再生
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第四步:潛能再生細胞繼續(xù)擴增開始形成組織
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組織細胞中的潛能再生細胞在適宜的生理環(huán)境和充足的生命再生物質(zhì)培養(yǎng)下開始擴增,分化和再生
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細胞連接開始形成組織細胞,成為多種功能和形態(tài)的細胞,其中新產(chǎn)生的潛能再生細胞也參與組織形成
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第五步:潛能再生細胞復(fù)制成新的組織器官
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這是由潛能細胞再生出的新器官。在它周圍有正在再生的組織。
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2、以小鼠小腸黏膜絨毛組織器官體外復(fù)制為例,介紹體外組織器官模型的建立;
取17天胚胎鼠小腸的近段,分別切成小塊,貼附在培養(yǎng)器皿的底部,加MEM培養(yǎng)液和美寶生命物質(zhì),共同培養(yǎng),首先使絨毛組織細胞從原位小腸組織塊上游離到培養(yǎng)液中,而后將游離出的組織細胞單獨培養(yǎng),促使組織細胞增殖分化;繼續(xù)培養(yǎng),增殖分化的細胞則自行連接,重新形成原位的絨毛組織器官。實現(xiàn)了體外組織器官模型的建立。(詳見絨毛組織器官復(fù)制的全過程圖片介紹圖2.1~2.7)。
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2.1 懷孕母鼠
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2.2 17天的胚胎
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2.3 從胚胎中取出的成體近端小腸
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2.4 把粘膜切成小塊
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2.5 在六孔細胞培養(yǎng)板中貼壁培養(yǎng)
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2.6 組織塊間的距離是1厘米
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小腸的培養(yǎng)
實驗組(加GIC)
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對照組(不加GIC)
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腸壁組織植塊貼壁的鏡下表現(xiàn)
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實驗組(加GIC)
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對照組(不加GIC)
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組織存活,一些細胞開始從培養(yǎng)基中的組織中游離和遷移出來
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組織死亡,從組織中遷移出的少數(shù)細胞也死亡了
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在實驗組中單細胞干細胞化增殖克隆復(fù)制
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由相互聯(lián)接的擴增細胞形成基礎(chǔ)組織(縱切面)
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形成最基礎(chǔ)組織
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基礎(chǔ)組織進一步擴大形成有形腸粘膜組織 |
3、生命再生物質(zhì)的組成
在新的組織器官體外模型建立后,繼續(xù)在體外用原有的培養(yǎng)液和美寶生命再生物質(zhì)培養(yǎng)的同時,盡速以新形成的組織器官為模型,篩選特異的生命物質(zhì),凡能促進增殖細胞形成絨毛組織器官的物質(zhì)和凡是能維持和延長絨毛組織器官模型生命的物質(zhì),均被選做絨毛組織器官的生命物質(zhì),與美寶生命物質(zhì)一起構(gòu)成腸絨毛組織器官生命再生物質(zhì)。而后將這些生命再生物質(zhì)以相適的劑型作用于肌體原位器官,使組織器官原位再生。(詳見生命再生物質(zhì)的小腸原位再生實驗介紹圖4.21~4.29)
本研究中再生的小腸粘膜與《科學(xué)》雜志上公布的小腸粘膜在形態(tài)學(xué)上的比較
本研究中再生的小腸粘膜和人體中的小腸粘膜在形態(tài)學(xué)上的比較
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